1. 荧光激发与信号产生
微阵列芯片扫描仪的核心原理是利用荧光标记技术。在微阵列芯片上,生物分子(如DNA、RNA或蛋白质)通常被荧光染料标记。当扫描仪的激光照射到芯片表面时,荧光标记物吸收特定波长的激光能量,并发出荧光信号。
2. 光学系统与信号收集
扫描仪的光学系统负责将荧光信号收集并聚焦到探测器上。通常采用共聚焦光路设计,这种设计能够有效提高信号的分辨率和灵敏度。具体过程如下:
激光光源:激光器发出特定波长的激光,经过扩束和聚焦后照射到芯片表面。
荧光收集:荧光信号通过物镜和滤光片系统,去除杂散光后被聚焦到探测器上。
共聚焦技术:通过针孔光栅控制聚焦深度,确保只有来自芯片表面的荧光信号被探测器捕获,从而减少背景噪声。
3. 信号检测与转换
荧光信号被探测器(如光电倍增管PMT)捕获后,转换为电信号。PMT能够将单个光量子转换为多个电子,从而放大信号。随后,电信号通过模数转换器(A/D)转换为数字信号,以便计算机处理。
4. 扫描与成像
扫描仪通过逐点或逐行扫描的方式,对微阵列芯片上的每个像素进行检测。扫描过程可以通过以下方式实现:
移动芯片:芯片装载平台在马达驱动下水平移动。
移动光束:通过微反光镜改变入射激光的方向。
多色荧光检测:扫描仪可以通过切换不同波长的激光和滤光片,分别检测不同荧光标记的信号。
5. 数据分析
扫描完成后,计算机软件对采集到的数字信号进行处理和分析。软件功能包括:
图像生成:将荧光信号转换为图像文件(如Tiff或BMP格式),并进行可视化。
数据分析:对荧光强度进行量化分析,提取生物分子的表达水平,并生成报告。
6. 技术优势
高灵敏度:能够检测到极低浓度的荧光信号。
高分辨率:通过共聚焦技术和高精度光学系统,能够分辨微小的生物分子点阵。
多色检测:支持多种荧光标记物,可同时检测多个生物分子。