常用方法:
1、直接提取法,也称鸟枪法。
2、人工合成法:A反转录法,B化学合成法。
具体方法:
1、浓盐法
2、阴离子去污剂法
3、酚/氯仿抽提法
4、水抽提法
5、醇沉淀法
6、热裂解碱法
7、煮沸裂解法
8、纳米磁珠法
9、还有超声法、反复冻融法、酶解法及低渗裂解等等多种方法。
实验室常用的DNA提取方法:
1、Chelex100法:在提取DNA时,加入Chelex100(由苯乙烯、二乙烯苯共聚体组成,含有成对的亚氨基二乙酸盐离子,起着螯合基团作用,对多价金属离子有极强亲和力),螯合了金属离子,防止了DNA降解,提高了PCR扩增成功率。
2、有机法:指用平衡酚(又叫饱和酚)、氯仿等按不同比例混合,采用不同方法提取DNA。
3、磁珠法:(异)硫氰酸胍(GuSCN)是强烈蛋白变性剂,不破坏蛋白质一级结构,能破坏细胞膜及核膜蛋白,并使核酸酶失活,释放DNA。磁珠可以特异性吸附DNA,与DNA结构及片段大小无关。
4、盐析法:溶解红细胞后,离心沉渣用PK消化,用大约6M饱和NaCl沉淀蛋白质,离心上清中DNA用无水乙醇沉淀,用TE溶解。
5、NaOH法:强碱溶解、变性蛋白质,破坏细胞膜及核膜,变性核酸酶,释放DNA,NaOH不破坏DNA一级结构。
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